المناقشة الالكترونية لرسالة طالب الماجستير محمد طالب حسين من قسم علوم الحياة

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالب الماجستير محمد طالب حسين والموسومة تواجد وتشخيص الجين السمي pks في عينات البكتريا المعوية الموجبة للجين والمعزولة سريرياً من المرضى العراقيين وذلك في يوم الأحد الموافق 2020/6/7 وعبر منصة ZOOM الالكترونية.

اوضح الطالب في مقدمة بحثه أن ذيفان الـ Colibactin هو عبارة عن جزيئات صغيرة تنتج بواسطة عدة افراد من العائلة المعوية Enterobacteriaceae مثلEscherichia coli, Klebsiella Pneumoniae, Enterobacter spp., Ciratobacter spp. Acintobacter spp., والتي تعيش في القناة المعوية للأنسان والحيوانات. هذ الذيفان يعمل على استحثاث تكسير المادة الوراثية مزودجة الشريط (الدنا-DNA)، انحرافات في الكرموسوم وكذلك يعمل على احداث خلل في عملية انقاسم الخلايا حقيقة النواة وايقافها في طورM/G2 . في هذه الدراسة، 100 عزلة بكتيرية سريرية تعود للعائلة المعوية تم الحصول عليهامن نماذج وعينات سريرية مختلفة، اذ تم عزلها من مشتفيات ومراكز طبية في محافظة بغداد/العراق. العزلات التي عزلت تم تعريفها استناداّ الى مجموعة فحوصات واختبارات اشتملت على المظهر الخارجي، الفحوصات الكيموحيوية، الفحوصات الفسلجية، API 20E والتعريف بأستخدام جهاز VITEK2. اظهرت النتائج ان بكتريا E. coli تمثل نسبة 51% من المجموع الكلي للعزلات، 28% K. pneumoniae، 12% P. aeruginsoa و E. aurogenes 9%، أعلى نسبة من العزلات البكتيرية تم الحصول عليها من عينات الخروج والادرار وبنسبة 49 و 34% على التوالي، بينما 10% تم الحصول عليها من مسحات الجروح و 7% من عينات الدم . عينات الدنا DNA للعزلات البكتيرية تم تضيمها بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل PCR لغرض معرفة انتشار مجموعة من جينات الكولبكتين متمثلة بـ (clbA, clbB, clbN and clbQ) .

اوضحت نتيجة الترحيل الكهربائي بأستخدام جل الاكاروزو الى ان clbA كان ذو وزن جزيئي بحدودbp 1002، clbB 550 bp ، clbN 700 bpو clbQ 821 bp في تسلسل القواعد النتروجينية. لوحظ من خلال النتائج ان 11% من مجموع العزلات البكتيرية المعزولة هي حاوية على الجينات الاربعة قيد الدراسة، انتشار جينات الكولبكتين بين العزلات البكتيرية تبين بان سبع عزلات من بكتريا E. coli حاوية عليها وعزلتين تعود لبكتريا K. pneumoniae موجبة لفحص هذه الجينات فيما احتوت عزلتين من بكتريا E. aerogenes على هذه الجينات، أعلى مستوى من الحساسية الدوائية للمضادات الحياتية بين العزلات الموجبة للكولبكتين تم تسجيلها للمضاد الحيوي Impenem وبنسبة 100%، وكذلك لوحظ مستوى عالي من الحساسية الدوائية تجاه المضادات Ceftriaxone, Cefotaxime, Piperacilline and Tobramycin. مقاومة ضعيفة من هذه البكتريا تم تسجيلها تجاه المضادات الحياتية Norfloxacin, Ceftaxidime and Nitrofurantion.، ولغرض دراسة الفعل الوظيفي لجينات الكولبكتين في كل من بكتريا E. coli, E. aerogenes استخدم خط الخلايا السرطانية نوع HeLa، اذ تم تعريض هذه الخلايا الى عزلت بكتيرية موجبة وسالبة لجينات الكولبكتين وفي فترتين زمنيتين مختلفة (6،24 ساعة) وبأستخدام ظروف نمو مثالية وبمعدل اصابة MOI 50 ، لوحظ فقط 10-15% من الخلايا تم قتلها بعد ان عوملت مع بكتريا E. coli سالبة لجينات الكولبكتين وبوقتين مختلفين، فيما ازدات نسبة قتل الخلايا الى 50% في حالة معاملتها بنفس البكتريا ولكنها موجبة للجينات قيد الدراسة، وارتفعت نسبة القتل الى 80% بعد مرور 24ساعة تعريض للبكتريا الموجبة للجينات.

اما في حالة معاملة الخلايا نوع HeLa ببكتريا E. aerogenes اوضحت النتائج بأن نسبة القتل تقريباً مماثلة لما هو علية في بكتريا E. coli، اذ تبين ان 90% من الخلايا تبقة حية في حالة معاملتها مع بكتريا E. aerogenes السالبة لجينات الكولبكتين ونسبة 75% قتل تم الحصول عليها في حالة تعريض الخلايا لنفس البكتريا ولكن في حالة انها موجبة للجينات قيد الدراسة، من خلال دراسة الخلايا المعرضة للبكتريا الموجبة لجينات الكولبكتين مجهرياً تبين ان خلايا HeLa اظهرت بعض الاستجابات لفعل لكولبكتين المنتج بواسطة قيد الدراسة وتبين ان هناك انخفاض واضح في عدد الخلايا المعاملة ببكتريا موجبة مقارنة بالكتريا السالبة لهذه الجينات، وكذلك لوحظ حدوث استطالة في انوية الخلايا، نتيجة المجهر الفلورسيني لخلايا HeLa المعاملة مع البكتريا الموجبة والسالبة للجينات وبتصبيغها بصبغة AO/EB اظهرت عدة صبغات للأنوية الخاصة بالخلايا، اذ بعد معاملة خلايا HeLa ببكتريا سالبة لعزلات E. coli و E. aereogens الحية تظهر الشبكة الكروماتينية بلون اصفر-برتقالي الى اصفر، بينما خلايا HeLa الميتة المعاملة مع البكتريا الموجبة ، تظهر الانوية بلون برتقالي الى احمر لماع، فيما تظهر الخلايا الحية HeLa الغير معاملة بأي نوع من البكتريا تظهر انويتها بلون اخضر وبدون اي لمعان او تفصص او تجزؤ بالانوية.

وقد تألفت لجنة المناقشة من السادة المدرجة أسماؤهم أدناه:

أ. د. خوام ريسان حسين / الجامعة التقنية الجنوبية / المعهد التقني الناصرية … رئيساً
أ. د. محمد عبد الدايم صالح / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً
أ. م. د. محمد محمود فرحان / جامعة النهرين / مركز بحوث التقنيات الاحيائية … عضواً
أ. د. منذر حمزة راضي / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً ومشرفاً
أ. م. د. صفاء الدين أحمد شنتر / جامعة بغداد / كلية العلوم للبنات … عضواً ومشرفاً

وقد تم قبول الرسالة منح الطالب درجة الماجستير في علوم الحياة .. ألف مبارك ..

<< الموضوع التالي | الموضوع السابق >>