مناقشة رسالة طالب الماجستير محمد مصطفى غضبان من قسم علوم الحياة

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالب الماجستير محمد مصطفى غضبان والموسومة عزل وتشخيص بكتريا السل الرئوي Mycobacterium tuberculosis ودراسة جينات المقاومة المتعددة MDR وذلك يوم الأحد الموافق 2018/2/25 وعلى قاعة المناقشات في عمادة الكلية .

أجريت الدراسة في معهد الأمراض الصدرية والتنفسية / بغداد للفترة من 2016/9/1 إلى 2017/1/1 ، حيث جمعت 500 عينة سريرية مختلفة من المرضى من كلا الجنسين وبأعمار مختلفة للتحري عن بكتريا Mycobacteriu tuberculosis بإستعمال الطرق التقليدية والجزيئية ودراسة التغاير الوراثي بين العزلات والتحري عن الطفرات المسؤولة عن  مقاومة البكتريا المتعددة للمضادات الحياتية Multidrug resistant .

بين الفحص المجهري المباشر للمسحات  بصبغة Ziehl-Neelsen ايجابية %12.8 من العينات 64) من أصل 500 عينة) ، زرعت جميع العينات على وسط لوفنشتاين جنسن (L.J)Lownstein Jensen media وقد أظهرت أن %18 من العينات 90) عينة) نمو حقيقي لبكتريا التدرن، وكانت  عينات القشع هي الأعلى إيجابية للفحص المجهري والزرع على وسط لوفنشتاين جنسن إذ كانت نسبة الإيجابية للإختبار %15.9 و %23.1 على التوالي , وبينت نتائج الفحوصات الكيموحيوية والتفريقية أن جميع العزلات تعود لبكتريا M. tuberculosis , كما بينت النتائج عدم وجود فروقاً معنوية في نسب الإصابة بمرض التدرن بين الذكور والأناث إذ شكلت 51% و49% على التوالي في حين كان هناك فروقاً معنويةعالية ((P<0.01 في نسب الإصابة بهذا المرض بين الفئات العمرية المختلفة إذ سجلت فئة (21-30) 23% تليها فئة (31-40) و(41-50) 22% .

استعملت الطرق الجزيئية Molecular method لتأكيد التشخيص التقليدي لـ10عزلات من M. tuberculosis  تم اختيارها بناءاً على إمتلاكها صفة المقاومة المتعددة . وأوضحت النتائج أيضاً الكشف عن جين 16S rRNA بأن جميع العزلات تعود إلى M. tuberculosis وبيّن تحليل تتابع القواعد للقطعة المضخمة من جين 16S rRNA في عزلات بكتريا M.tuberculosis مع تتابع العزلة القياسية المسجلة في المركز الدولي لتقانة المعلوماتية الحياتية  NCBIمطابقة بنسبة 99% , إذ كان هناك اختلاف في قاعدة واحدة وسجلت هذه الطفرة في قاعدة البيانات NCBI تحت الرقم التسلسلي MG030630 .

كما بيّن الكشف عن عنصر الغرس IS6110 ان جميع العزلات تحتوي هذا عنصر وبين تحليل تتابع القواعد تطابق بنسبة 100% مع تسلسل عنصر الغرس في العزلة القياسية لبكتريا M. tuberculosis المحفوظة في قاعدة البيانات . وأظهرت العزلات تغايراً وراثياً اعتماداً على اعداد عنصر الغرس IS6110  إذ وجد ان 80% من العزلات تحتوي على عدد مرتفع من نسخ من عنصر الغرس IS6110 ( 10-6 نسخة) و20% تحتوي على عدد قليل من نسخ هذا العنصر(1- 5 نسخة) .

تم اخنبار حساسية جميع عزلات (90 عينة) بكتريا التدرن لمضادات الخط الاول المستعملة في علاج مرض االتدرن (Ethambutol, Streptomycin, Rifampicin, Isoniazid) بأستعمال الطريقة النسبية proportion methods حيث أظهرت 53.3% (38 عزلة من اصل 90) مقاومة للمضادات المذكورة , وكانت نسبة 30% من العزلات (27 عزله) مقاومة لنوع واحد من المضادات الحياتية ونسبة 12% (11 عزلة) مقاومة لأكثر من مضاد واحد , وشكلت نسبة العزلات التي أمتلكت صفة المقاومة المتعددة للمضادات (MDR-TB) 11.1% (10 عزلة) . وكانت أعلى نسبة مقاومة لمضاد Isoniazid (38.9%) تليها المقاومة لمضاد rifampicin ( 25.6%) ثم المقاومة لمضاد Strepotomycin (17.8%) ، بينما كانت اقل نسبة مقاومة لمضادEthambutol  (11.1%) وبفروقٍ معنوية عالية عند مستوى (P<0.01) .

وأظهرت نتائج تحليل تتابع سلسلة القواعد لجينات inhA,katG,rpoB في 10 عزلات التي أمتلكت صفة المقاومة المتعددة , أن جميع العزلات 100% تحتوي على طفرة في جين rpoB (60% في شفرة S450L و 40% في شفرةS450T  و10% في شفرة(G481E  المسؤول عن المقاومة لمضاد Rifampicin , في حين 80% من العزلات كانت تحتوي على طفرة في جين katG في الشفرة S315T  و30% في كلا الشفرتين Q356L وM377L على التوالي . وكانت 30% من العزلات تحتوي على طفرة في جين inhA (10% في الشفرهI12V  و20% في الشفرة(M199L المسؤول عن المقاومة لمضاد Isoniazid ايضاً .

وبينت دراسة التراكيب الثانوية والثالثية للبروتينات المشفرة من جينات rpoB وkatG وinhA , أن الطفرة الحاصلة في هذه الجينات تؤدي الى تغير نسب التراكيب الثانوية والثالثية في البروتينات الناتجة وهذا بدوره يمنح بكتريا M. tuberculosis صفة المقاومة للمضادات الحياتية المتعددة . وأظهرت نتائج الدراسة أن عزلات بكتريا M. tuberculosis تعود الى مجموعتين متغايريتين وراثياً اعتماداً على اعداد نسخ عنصر الغرس IS6110 وتعد الطفرة الحاصلة في جين 16S RNA والمسجلة في قاعدة البياناتNCBI  تنوع شكلي لهذا الجين في العزلات المحلية , وان الطفرات الحاصلة في جينات rpoB, katG, inhA مسؤولة عن المقاومة المتعددة للمضادات الحياتية (MDR-TB) من خلال التاثير على الشكل ثلاثي الأبعاد للبروتين الذي يسبب مقاومة المضاد الحياتي (الايزونيازد والريفامبسين) ويمنح بكتريا M. tuberculosis صفة المقاومة لهذه المضادات الحياتية .

وتألفت لجنة المناقشة من السادة المدرجة أسماؤهم أدناه :

1. الأستاذ الدكتور حميد مجيد جاسم / جامعة النهرين / كلية التقنيات الأحيائية … رئيساً
2. الأستاذ الدكتور محمد إبراهيم نادر / جامعة بغداد / معهد الهندسة الدراثية والتقنيات الأحيائية … عضواً
3. الأستاذ المساعد الدكتور كريم إبراهيم مبارك / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً
4. المدرس الدكتور مثنى عبد القادر صالح / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً ومشرفاً

وقد تم قبول الرسالة وحصل الطالب على درجة الماجستير في تخصص الأحياء المجهرية … ألف مبارك .

<<  الموضوع التالي  |  الموضوع السابق  >>