دراسة تشخيصية ووراثية لـ Pseudomonas spp المقاومة لمضادات البيتالاكتام

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالبة الماجستير زينب محمد حميد عباس والموسومة (دراسة تشخيصية ووراثية لبكتريا Pseudomonas spp المقاومة لمضادات البيتالاكتام) وذلك في يوم الخميس الموافق 2017/1/19 وعلى قاعة المناقشات في عمادة الكلية.

أجريت هذه الدراسة في مستشفى بعقوبة التعليمي والعيادة الإستشارية إبتداءً من السادس من شهر ايلول سنة 2015 الى الثلاثين من شهر نيسان سنة 2016 , وذلك لأهمية جراثيم الزائفة الزنجارية المقاومة لمضادات البيتالاكتام والمسببة لأخماج سريرية مختلفة , إذ جاءت هذه الدراسة لتسلط الضوء على عزل جراثيم الزائفة الزنجارية وطرق تشخيصها والكشف على مدى مقاومتها لمضادات البيتالاكتام والكشف عن بعض الجينات التي تشفر لإنزيمات البيتالاكتاميز والمحطمة لمضادات البيتالاكتام , إضافة الى الكشف عن بعض عوامل الضراوة التي تنتجها هذه الجراثيم , وأهمية عوامل الضراوة وعلاقتها بالمقاومة المتعددة لمضادات الحياة.

تضمنت الدراسة جمع 176 نموذج من أخماج الحروق والجروح وأخماج الأُذن والمجاري البولية , إذ بلغ عدد المرضى الذكور 115 (65.34%) والمرضى الإناث 61 (34.66%) , وتراوحت أعمارهم (60-10) سنة , 85.23% مرضى غير راقدين و 14.77% مرضى راقدين في المستشفى , وتمَّ زرع النماذج المرضية على وسط الماكونكي الصلب ووسط الدم الصلب ووسط السيدوموناس الصلب الاساس ولوحظت الصفات المظهرية للمستعمرات , وأُجريت الفحوصات الجرثومية والكيموحيوية القياسية لتشخيص العزلات الجرثومية , إذ تضمنت فحص الاوكسيديز والكتاليز و إختبار IMVC , وتمَّ تأكيد التشخيص بإستخدام جهاز VITEK 2, إضافة الى إجراء التشخيص الجزيئي بالكشف عن وجود الجين 16S rDNA في العزلات الجرثومية بإستخدام جهاز تفاعل البلمرة التسلسلي PCR.

تمَّ عزل 20 عزلة جرثومية من كلا الجنسين ومن مختلف الأعمار , وبلغت نسبة تشخيص عزلات الزائفة الزنجارية بإستخدام جهاز VITEK2 (%100) , هذا وقد كشف التشخيص الجزيئي للعزلات قيد الدراسة أنها حاملة للجين 16S rDNA وبنسبة (%100) , وبلغت نسبة العزلات من الذكور 55% ومن الإناث 44% , و بلغت نسبة العزلات من أخماج الحروق والأُاذن والمجاري البولية والجروح (%18.18) , (%11.60) , (%10.81) , (%6.25) على التوالي وبفارق إحصائي معنوي عالي جداً=0.00001 P.

أُجري إختبار الحساسية لعشرة من مضادات البيتالاكتام بإستخدام طريقة Kerby- Bauer, وحُدد التركيز المثبط الادنى MIC للمضادين Cefotaxime وCeftazidime بطريقة التراكيز المتسلسلة المتضاعفة , أظهرت العزلات مقاومتها لمضادات مجموعة السيفالوسبورينات بشكل متفاوت , وبلغت نسبة المقاومة للمضادات Ceftazidime , Cefotaxime , Cephalexin ,Cephalothin , Cefaclor (90% , 25% , 100% , %100 , 15%) على التوالي . تراوحت قيم المتوسط الحسابي ±الانحراف المعياري SD للتركيز المثبط الأدنى MIC لمضاد Cefotaxime (78 µg/ml ± 119.61) , ومضادCeftazidime (74µg/ml ± 266) على التوالي.

كما أُجري الكشف عن إنتاج العزلات الجرثومية لعوامل الضراوة التي شَمِلت إنزيمات البروتييز على وسط الحليب منزوع الدسم والجيلاتينيز على وسط الجيلاتين والهيمولايسين على وسط الدم الصلب المضاف له 5% من الدم البشري , والكشف عن تكوين الاغشية الحيوية بطريقة الصفيحة الدقيقة والكشف عن وجود مضخات الدفق بطريقة العجلة الخشبية , هذا وقد تمَّ الكشف عن إنتاج إنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف بطريقة الأقراص المدمجةCDT وإنزيمات البيتالاكتاميز المعدنية بطريقة إتحاد المضاد مع EDTA (CMDT) , بلغت نسبة العزلات المُنتجة لإنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف (%55) , في حين لم تكن أيًّ من العزلات منتجة لإنزيمات البيتالاكتاميز المعدنية , كما أظهرت (%100)من العزلات قابليتها على تكوين الاغشية الحيوية , وإمتلكت (%95) منها أنظمة دفق.

واخيراً , تمَّ إستخلاص الحامض النووي DNA للجراثيم التي أظهرت مقاومتها للمضادين Ceftazidime وCefotaxime وأُجري الكشف عن الجينات bla CTX-M-1 , bla CTX-M-3 و bla PER-1 بإستخدام جهاز تفاعل البلمرة التسلسليPCR والكشف عن حجم الجين بإستخدام مصدر الأشعة فوق البنفسجية , إذ بلغت نسب العزلات الحاملة للجينات bla CTX-M-1 وbla CTX-M-3 (%72.7) و(%63.63) على التوالي , ولم تكن أي من العزلات الجرثومية حاملة للجين bla PER-1 .

أظهرت هذه الدراسة عدة إستنتاجات هي إن جراثيم الزائفة الزنجارية من المسببات المهمة لأخماج الحروق والجروح وأخماج الأُذن والمجاري البولية , وإنَّ تشخيص العزلات الجرثومية بإستخدام الجين 16S rDNA تعدُّ طريقة سريعة واكيدة وغير مجهدة قياساً بالطرق التقليدية , وإنَّ لجراثيم الزائفة الزنجارية القابلية على المقاومة المتعددة MDR لمضادات البيتالاكتام ومدى قابلية جراثيم الزائفة الزنجارية على إنتاج عوامل الضراوة وأهمية عوامل الضراوة والجينات المشفرة لإنتاج إنزيمات البيتالاكتاميز في المقاومة المتعددة لمضادات الحياة.