مناقشة رسالة طالبة الماجستير زينب ياسين خضير من قسم علوم الحياة

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالبة الماجستير زينب ياسين خضير الموسومة دراسة الاستجابة الميكروبية القاتلة للبايوسيانين تجاه العزلات الجلدية لخميرة المبيضات وذلك في يوم الخميس الموافق 2020/12/27 وعلى قاعة المناقشات في عمادة الكلية.

أوضحت الطالبة في مقدمة دراستها أنه تعد صبغة البايوسيانين التي تنتجها بكتريا الزائفة الزنجارية احدى نواتج الايض الثانوي التي لها اثرمهم في فعالية البكتريا والتنافس في البيئة. أجريت الدراسة بهدف تقيم الاستجابة المايكروبيةالقاتلة للبايوسيانين تجاه عزلات خميرة المبيضات. شملت الدراسة الحالية من مجموع (190) عينة سريرية من الجروح والتهابات الحروق والتهابات المسالك البولية والدم والاذن الوسطى من المرضى بمستشفى بعقوبة التعليمي والعيادة الاستشارية / محافظة ديالى، خلال المدة من شهر تشرين الاول 2019 لغاية نهاية شباط 2020 تم زرعها على وسط المغذي الصلب السيدوموناس الصلب وتم تشخيصها بالاختبارات الكيموحيوية وتم التأكيد في التشخيص باستخدام عدة التشخيص API 20 E. تشخيص 42 عزلة من بكتريا Pseudomonasaeruginosa وكذلك جمعت 30)) عينة من بيئة التربة من أعماق مختلفة.

تم استخلاص صبغة البايوسيانين من العزلات السريرية والعزلات البيئية لبكتريا Pseudomonasaeruginosa وتم قياس تركيز الصبغة المستخلصة من مصادر مختلفة وكان اعلى تركيز لها من مصدر الدم بلغت 7,2ملي غرام/ مول وبطول موجي 520 نانوميتر. تم تحليل مركب البايوسيانين باستخدام جهاز FTIR للكشف عن المجاميع الوظيفية في التركيب الكيميائي والاواصرومن الاواصر التي أظهرت فعالية عند 3739.7 سم –1 الى وجود الاصرة (o-H) وعند القيمة 2333.8 سم –1الى وجود اصرة اروماتية (C-H ) وعند القيمة 1660.7 سم –1الى وجود اصرة C=N وعند القيمة 1265.5الى وجود اصرة C-O وكذلك تحليلها باستخدام جهاز GC-Mass للكشف عن المركبات الفعالة الموجد ففي مصدر الحروق والاذن الوسطى مثل الفينازين 2-a],,Pyrrolo[1, hexahydro-3-(2-methylpropyl امافي مصدر الادرار مثل الفينازين 1–Octadeceneاما مصدر الدم وهي الفينازين و Octadecene 1- وغيرها أما مصدر التربة والجروح وكذلك تحتوي على البايوسيانين و1–Hexadecane و منDimethoxyphenol acetate-3,5هذه المركبات الموجود في المصادر المختلفة لها تأثير مضاد للفطريات ومضاد للبكتريا ومضاد للأكسدة.

تم جمع 86)) مسحة من عينات سريرية مختلفة شملت (57عينة فموية، 29عينة جلدية) تراوحت أعمارهم من ((11-1 سنة من كلا الجنسين من المرضى المصابين بداء المبيضات الجلدي والفموي الذين راجعوا مستشفيات (بعقوبة التعليمي ومستشفئ البتول ومستشفى الخالص) خلال المدة . الواقعة من بداية شهر كانون الأول (2019)الى نهاية شهر شباط 2020.

شخصت 33)) عزلة تابعة لخميرة المبيضات البيضاء تم تشخيصها ب الأوساط الزراعية وتم تأكيد التشخيص باستخدام جهاز الفايتك VITEK. أجري اختبار حساسية المضادات الحيوية باستخدام (الامفوترسين B , كيتوكونازول).حيث أظهرت النتائج ان العزلات المقاومة كانت ضد الكيتوكونازول وبنسبة75%)) واقل مقاومة للامفوترسين B وبنسبة (33.3%)وبينت نتائج التحليل الاحصائي انه وجود فروق معنوية بين المضادين عند مستوى0.05) (P≤وتم الكشف عن تكوين الاغشية الحيوية باستخدام طريقة MTP)) MicroTiterPlate method حيث بيّنَ النتائج أن( (12عزلة ضعيفة و14))متوسطة و(3)قوية بالمقارنة مع عينة السيطرة السالبة اكثر العزلات تمتلك قابلية تكوين الاغشية الحيوية لكن في درجات متفاوتة.

تم اختبار الفعالية التثبيطية لصبغة البايوسيانين تجاه عزلات خميرة المبيضات المقاومة للمضادات الفطرية,اشارت النتائج الى أن مستخلص البايوسيانين المعزول من مصادر سريرية وبيئة (الحروق والدم والإدرار والاذن الوسطى ) عند تراكيز1,2,3,4) مايكرو غرام مل) له تأثير قاتل للمبيضات وعند اجراء التحليل الاحصائي تبين ان افضل تركيز عند (1) المعزولة من مصدر الادار وعند مقارنته مع تركيز 2 لم يوجد فروق معنوية امامقارنتة مع تركيز 4و3 كانت هناك فروق معنوية عند مستوى احتمالية (PValue 0.05)اماالمعزول من مصدر الدم والتربة وليس لة تأثير ضد المبيضات .

الدراسة الجزيئة شملت استخلاص الحامض النووي DNA لعزلات خميرة المبيضات البيضاء Candida albicans وتم الكشف عن تكوين عزلات خميرة المبيضات البيضاء C.albicans لجينات عوامل الضراوة بوساطة بادئات محددة وهي( AINT1و( HWP1 حيث أظهرت باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل والكشف عن حجم الجين أظهرت نتائج الترحيل الكهربائي للهلام المنتج ان 11(90%) من العزلات كانت موجبة الحاملة لجين AINT1و 3(66.6%) من العزلات كانت موجبة لجين HWP1 بعد ذلك تم ارسال ناتج PCRلكلا الجينين لمعرفة تتابع النيوكلوتيدات (Sequence) باستخدام تقنية Gene -Sequencing. بينت نتائج تحليل تتابع النيوكلوتيدات لكلا الجينين بعد اجراء المطابق ان العزلات المعاملة بمصدر البايوسيانين بالنسبة لجين AINT1 من (1-4) كانت مطابقة لم يحصل أي تغير في الحامض الاميني اما العزلات رقم (5,6) حصول طفرات استبدال بتحول الحامض الاميني الادنين(A) الى الحامض الاميني كوانين(G) ولكن لم يحصل تغير في الحامض الاميني كانت هذه من نوع الطفرات الصامتة اما بالنسبة لجين HWP1 وكانت النتائج مطابقة.