مناقشة رسالة طالبة الماجستير ميسم هيلان كريم من قسم علوم الحياة

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالبة الماجستير ميسم هيلان كريم والموسومة تثبيط تكوين الغشاء الحيوي لبكتريا Acinetobacter baumannii المقاومة لمضاد الاميبينيم وذلك في يوم الاثنين الموافق 2019/4/29 وعلى قاعة المناقشات في عمادة الكلية.

اجريت الدراسة خلال الفترة من بداية أيلول 2017 الى نهاية كانون الثاني 2018 في مستشفى بعقوبة التعليمي, جمعت 150 عينة من مصادر سريرية مختلفة من كلا الجنسين وبأعمار مختلفة للمرضى الراقدين وغير الراقدين في المستشفى , شملت على 55 عينة جروح, 40 عينة حروق , 25 عينة قشع , 20 عينة ادرار لمرضى اخماج المسالك البولية و10 عينات دم لمرضى التجرثم الدموي.

اعتمد في تشخيص العزلات البكتيرية على الصفات الزرعية والمجهرية والاختبارات الكيموحيوية بالاضافة الى استخدام عدة API-20E و جهاز VITEK2 للتأكد من تشخيص العزلات البكتيرية, شخصت 14 عزلـــــــة بكتيريـــــــة بنسبة 9.3% تعود لبكتريا راكــدة بومانيـة Acinetobacter baumannii .

لم تظهر نتائج الدراسة فرقاً معنوياً بين الجنس ونوع العينة, اذ بلغت نسبة المرضى الذكور 54.7% مقارنة بالاناث التي كانت 45.3%, كما بلغت نسبة المرضى الراقدين في المستشفى %80مقارنة بالمرضى غير الراقدين التي كانت20% وبفارق معنوي عالي.

اختبرت حساسية العزلات البكتيرية تجاه 16 مضاداً حيوياً مختلفاً بإستخدام طريقة Kirby-Bauer فأظهرت كل العزلات مقاومة بنسبة 100% لمضادات Ceftriaxone, Augmentin , Cefotaxime , Ceftazidime, Cefepime وPiperacillin ومقاومة أقل من ذلك لمضادي Tetracycline وCiprofloxacin بنسبة 92.9% لكل منهما, وبنسبة 85.7% لكل من مضادي Gentamicin و Co-Trimoxazole.

بينما تفاوتت نسب المقاومة للمضادات الاخرى فكانت نسبة 78.6% لمضاد Tobramycin وبنسبة 57.5% لكل من مضادي Aztreonam وAmikacin وبنسبة 50% لمضاد Meropenem وبنسبة 42.8% لمضاد Imipenem و 14.3 % لمضاد Colistin .

بينت نتائج الكشف عن عوامل الضراوة لبكتريا A. baumannii ان جميع العزلات لها القابلية على تكوين المحفظة وقدرتها على الالتصاق Adhesion بسطوح الخلايا الظهارية للجهاز البولي للانسان وانتاج انزيم اللايبيز بنسبة100% , بينما كانت نسبة إنتاج انزيم البروتيز 85.7% وانزيم الجيلاتينيز بنسبة 71.4% , كما تم الكشف عن قدرة العزلات على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm بطريقة صفيحة المعايرة الدقيقة Micro Titter Plate فكانت 85.7% مكونة للغشاء الحيوي, منها 28.6 % مكونة للغشاء الحيوي بمستوى قوي, و35.7% مكونة للغشاء الحيوي بمستوى متوسط, و21.4 % مكونة للغشاء الحيوي بمستوى ضعيف, في حين كانت عزلتان غير مكونة للغشاء الحيوي بنسبة 314. % .

تم الكشف عن انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف بطريقة الاقراص المتاخمة المحورة Disc Approximation وانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية بطريقة اتحاد المضاد الحيوي EDTA-IPM, اظهرت النتائج بأن عزلة واحدة بنسبة 7.1 % منتجة لانزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف و11 عزلات بنسبة 78.6 % منتجة لانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية.

استخلص الحامض النووي DNA للعزلات البكتيرية, واجرى الكشف عن جين ompA الموجود في جميع عزلات جنسAcinetobacter والذي يشفر بروتين الغشاء الخارجي Outer membrane protein A(OmpA), وجين bap الموجود على كروموسوم أغلب عزلات بكترياA. baumannii إذ يشفر البروتين المرتبط بالغشاء الحيوي Biofilm associated protein (Bap) , وجينات bla_IMP , bla_VIM المشفرة لانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية وهي مسؤولة عن مقاومة مضادات الكاربابينيم في بكتريا A. baumannii, بإستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل PCR والكشف عن حجم الجين بوساطة الترحيل الكهربائي وبإستخدام مصدر الاشعة فوق البنفسجية, وبلغت نسبة العزلات الحاملة لجينات ompA وbap بنسبة 92.8% على التوالي والعزلات الحاملة لجينات bla_IMP بنسبة35.7 % و bla_VIM بنسبة 85.7% .

اختبر التأثير التثبيطي لمستخلص الكركم المائي (البارد, الحار) والمستخلص الكحولي, جسيمات الفضة النانوية AgNPs)) ومضاد Azithromycin على بكتريا A. baumannii, بينت النتائج ان للمستخلص المائي البارد والحار والمستخلص الكحولي لنبات الكركم فاعلية مضادة للبكتريا بالتراكيز (200,100,50,25,12.5) ملغم/مل وباقطار تثبيط (,22 ,17 14, ,9 0) ملم, (,19 ,15 12, 8,0) ملم, (,15 , 13 12, , 90) ملم على التوالي, تم تحديد التركيز المثبط الادنى MIC وما تحته SubMIC للمستخلص المائي (البارد, الحار) والمستخلص الكحولي لنبات الكركم تجاه نمو العزلات البكتيرية , اذ بلغت قيمة MIC للمستخلص المائي البارد 6.25 ملغم/مل وقيمة SubMIC 3.13 ملغم/مل ، اما بالنسبة للمستخلص المائي الحار والكحولي فبلغت قيمة MIC 12.5 ملغم/مل لكل منهما، وقيمة SubMIC 6.25 ملغم/ مل لكل منهما ايضاً.

درس التركيز المثبط الادنى (MIC) لجسيمات الفضة النانوية ضد عـزلاتA. banumannii وبالتراكيز (5000, 10000, 20000) مايكروغرام /مل , فوجد أقل تركيز لجسيمات الفضة النانوية اعطى تثبيط للعزلات البكتيرية كان 20000 مايكروغرام/مل, وبلغت قيمة SubMIC لهذه المادة 10000 مايكروغرام /مل. اما بخصوص مضاد Azithromycin فقد بلغت قيمة MIC 512 مايكروغرام/مل, بينما كانت قيمة SubMIC لهذا المضاد 256 مايكروغرام/مل.

أظهرت قراءة جهاز الاليزا عدم تأثير التركيز تحت المثبط الادنى SubMIC لمستخلصات الكركم المائية والكحولية ومضاد Azithromycin في تثبيط الغشاء الحيوي لبكتريا A. baumannii المقاومة لمضاد Imipenem, بينما أظهرت جسيمات الفضة النانوية التي استخدمت بحجم 20 نانومتر تثبيطاً للغشاء الحيوي.

وتألفت لجنة المناقشة من السادة المدرجة اسماؤهم أدناه: