مناقشة رسالة طالبة الماجستير شيماء مجيد محمد من قسم علوم الحياة

ناقش قسم علوم الحياة في كلية العلوم بجامعة ديالى رسالة طالبة الماجستير شيماء مجيد محمد والموسومة التحري الجزيئي والتعبير الجيني لجيني hcp و blaOXA-51 في Acinetobacter baumannii من مصادر سريرية مختلفة وذلك في يوم الاثنين الموافق 2020/11/3 وعلى قاعة المناقشات في عمادة الكلية.

أوضحت الباحثة في رسالتها أن الراكدة البومانية واحدة من مسببات الأمراض الانتهازية ذات المقاومة المتعددة للأدوية (MDR) ، ويرجع ذلك خصوصا إلى قدرتها العالية على اكتساب المقاومة لمجاميع المضادات الحيوية المتنوعة. تم الحصول على عشرين عزلة (9.7%) من Acinetobacter baumannii من (207) عينة سريرية. تضمنت جروح , حروق , بلغم , الدم من الإصابات من كلا الجنسين على حد سواء ، وأعمار مختلفة.

تم تحديد الحساسية لمضادات الميكروبات لعزلات A. baumannii بطريقة الانتشار القرصي ،لـ 13 مضاد حيوي . تمايزت العشرين عزلة من A. baumannii قيد الدراسة لنمطين حسب مقاومة المضادات الحيوية في اختبار الحساسية ، جميع العزلات كانت متعددة المقاومة ، خمسة عشر 75%)) عزلة MDR قاومت (5-9) مضاد حيوي ، اثنان (10% ) عزلات XDR قاومت (12) مضاد حيوي ، وثلاث عزلات (15%) من عزلات XDR قاومت كل المضادات الحيوية التي تم استخدامها.تم تحديد MIC  (التركيز المثبط الأدنى) لجميع العزلات العشرين لمضادين حيوين (Imipenem ، Meropenem). وباستخدام الطريقة المعيارية  بواسطة لوحة العيار الدقيقة عن طريق التخفيف التسلسلي لـ Müeller Hinton Broth وقد تمت قراءتها بواسطة قارئ ELISA تحت طول موجي 630 نانومتر. أظهرت النتائج أن قيم MIC للـ Imipenem تراوحت من (8-≥1024) ميكروغرام / مل و قيم MIC لـ Meropenem تراوحت (≤4-128) ميكروغرام / مل.

اجري فحص الكشف عن اصناف لـ β-Lactmases وهي (ESBLs ، AmpC ، MBLs). اضهرت النتائج اختبار تآزر القرص المزدوج (DDST) للكشف عن ESBLs أن جميع العزلات  ذات مقاومة عالية لـ ((100% للسيفوتاكسيم والسيفتازيديم)) ولكن لم يكن هناك أي تآزر بين أقراص المضادات الحيوية ، وذلك بسبب المقاومة العالية للعزلات. تم استخدام اختبار مقاومة سيفوكسيتين للكشف عن إنتاج AmpC ، وكانت النتائج  الموجبة لـ 6عزلات (30%). تم الكشف عن النمط الظاهري لـ MBLs عن طريق اختبار CEDT ، وكانت النتائج كانت18 (90%) منتجة لإنزيم MBLs بينما 2 (10%) عزلة سلبية .وكانت نتائج الكشف الجزيئي بواسطة تقنية الـ  PCR التقليدية أن 14 عزلة (70%) من A. baumannii كانت تمتلك جين blaVIM و 6 (30%) عزلات لا تمتلكها ، وجميع العزلات العشرين لا تمتلك جينات blaNDM-1 ، blaIMP.

تم إجراء عملية الكشف عن عوامل الضراوة من أجل تحديد مدى امراضية A. baumannii.حيث تم الكشف عن تكوين الغشاء الحيوي بطريقتين ، الفحص النوعي بطريقة الأنبوب ,وأظهرت النتائج أن جميع العزلات كونت حلقة أرجوانية بعد تصبيغهاا بصبغة الكرستال البنفسجية ، و طريقة المعايرة الكمية بواسطة لوحة العيار الدقيقة ، كانت النتائج 7 (35% )من العزلات كونت غشاءً حيويًا قويًا بينما 12 (60%) كونت غشاء حيوي معتدل و 1 (5%) كونت غشاء حيوي ضعيف .

تم استخدام طريقة القياس اللوني للكشف عن استشعار النصاب الحسي. كانت العزلات منتجة لإشارات النصاب الحسي بنسب مختلفة ، 7 (35% )عزلات من A. baumannii كانت عالية الإنتاج لجزيئات (Acyl-Homoserine-Lactones) ، بينما 11 (55%) عزلة كانت معتدلة الانتاج ، و 2 (10%) عزلة لم يكن لها نشاط تكوين AHL.

تم استخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التقليدية للكشف عن جين hcp الذي يعد علامة جزيئية وظيفية لنظام الـ T6SS وهذه الدراسة كانت غير مسبوقة في العراق, حيث بينت  النتائج أن هذا الجين تواجد في 95%)19) عزلة ، ولكن عزلة واحدة  لم تمتلك  الجين.

تم استخدام تقنية qRT PCR في الوقت الحقيقي باستخدام (Syber green) لدراسة التعبير الجيني بعد المعاملة بتركيز (128) ميكروغرام / مل من ((Imipenem لجينين ،جين blaOXA51 احد جينات مقاومة Carbapenems وجين الـ hcp ( (T6SS. أعطى الجين blaOXA51 تعبيرًا عاليًا بدرجات مختلفة في 3 عزلات من ثلاثة مصادر (جروح ، حروق ، دم) ،حيث كان مستوى التعبير الجيني بمتوسط (1.45) أكثر من التعبيرالجيني  لعزلات السيطرة ، لكن جين hcp  أعطى مستوى تعبير جيني منخفض مقارنة مع التعبير الجيني لعزلات السيطرة بدرجات مختلفة حيث كان  متوسط  مستوى التعبير الجيني0.88.

تم إجراء التسلسل لجيني (16S rRNA) وجين hcp ضمن العزلة A.baumannii 13)). وقد بينت  نتائج الدراسة  إلى أن الجزء 16S rRNA المُضخم أظهر خمسة اختلافات في الأحماض النووية ، g.422C> T ، g.431A> C ، g.433C> T ، g.806T> C ، وطفرة ادخال g.918-919G  مقارنة مع متواليات الريبوسوم. فيما يتعلق بجين hcp  ,بينت  النتائج أن موضع hcp المتضخم أظهر طفرة صامتة واحدة (g.279978C> T) مقارنة بتسلسلات المنطقة المرجعية.

وتم تسجيل سلالة واحدة من A. baumannii من مصدر بشري في بعقوبة / ديالى ولها رمز (SHRRWY.80) وكان رمز التسلسل (MT551041) ورمز التغاير (MT551041.1) لتسلسل الجينات rRNA   16S وكان رمز التسلسل (LC553000) ورمز التغاير(LC553000.1) لجين hcp .

وتألفت لجنة المناقشة من السادة المدرجة أسماؤهم أدناه:

أ. د. واثق عباس حتيت / جامعة بغداد / معهد الهندسة الوراثية والتقنيات الحياتية … رئيساً

أ. د. زينب محمد نصيف / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً

أ. د. عمار احمد سلطان / جامعة ديالى / كلية التربية للعلوم الصرفة … عضواً

أ. د. هادي رحمن رشيد / جامعة ديالى / كلية العلوم … عضواً ومشرفاً

وقد تم قبول الرسالة ومنح الطالبة درجة الماجستير في تخصص علوم الحياة .. ألف مبارك ..

<<  الموضوع التالي  |  الموضوع السابق  >>